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临床检验方法确认与性能验证相关知识(上)

发布时间:2019-10-22

 .概念

确认validation):通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。

注:①已确认一词用于表示相应的状态。②确认所使用的条件可以是实际的或是模拟的。

验证verification):通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。

注:① 已验证一词用于表示相应的状态。②认定可包括下述活动,如:变换方法进行计算;将新设计规范与已证实的类似设计规范进行比较;进行试验和演示;发布文件前的评审。

.目的

为了使实验室之间结果互认,符合医院实验室管理办法、CLIA’88CNAS-CL02相关规定要求。

.具体操作应掌握的相关知识

(一)掌握统计学基础知识:

1、概述

2、临床检验结果质量检验数据的分类

3、统计方法的分类

4、随机变量及其分布

5、正态分布

6、抽样分布

7、大数定律和中心极限定律

8、平均数与标准差

9、均数的抽样误差与t分布

10、两均数差别的统计学意义检验

11、方差分析

12、直线回归与相关

13、观察值一致性

(二)检验方法分为三类:

决定性方法 definitive method ): 经详尽研究尚未发现 不准确度或不确定性原因的方法;

参考方法 reference method ): 经详尽研究证实其不准确度与不 精密度可以忽略的方法;

常规方法 routine method ): 可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。

(三)方法的选择

选择特异性、灵敏度、精密度好的;校准可溯源的;有实验证据的。

(四)常用物质

1.标准物质/参考物质 reference material ):是一类充分均匀,并具有一个(或多个)确定的特性值的材料或物质,标准物质的定值结果一般表示为:标准值 ± 总不确定度。 标准物质证书是介绍标准物质的技术文件,是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质( certified reference material, CRM ),其特性值由建立了溯源性的程序确定,可溯源至准确复现该特性值的计量单位,且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。 

作用:校准仪器设备、评价测量方法,或给其它物质赋值

分类:一级标准物质 primary reference material ):稳定、均一,采用高度准确、可靠的若干方法定值,可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。二级标准物质 secondary reference material ):用一级标准物质校准,参考方法定值。

2.校准品 calibrator :用于校准的测定标准。

3.质控物/控制品 control material ):即具有与检测过程相适应的特性,其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质控物,其瓶间变异必须小于监测系统预期的变异,其常规检测应有助于确认报告范围。一般分为定值质控品、非定值质控品、检测系统配套的控制品、正确度控制品。

需要注意的是:其实不定值控制品质量和定值的一样,只是厂商没有邀请实验室为控制品定值,在说明书上除定值内容外,其余都有,还告诉了用户高值或低值,且便宜。 但无论定值或不定值,用户在使用时,须使用自己的检测系统建立自己的均值和标准差。只是定值控制品有一个预期的范围便于用户对照。但仅为对照,若两者相似不能说明用户结果准确,只能说明它的控制品是好的。因此不要将预期范围认为是控制的允许范围。不相似也不说明结果有问题。

(五)一些基本术语

准确度(accuracy:检测结果与被测量真值或约定真值(可接受参照值)之间的一致程度。

可接受参照值:用来做比较的经协商同意的值,它可以是理论值(真值),赋值,公认值或由程序确定的值。准确度不能直接得出,只能用偏离(deviation)也就是误差从反面衡量

误差:测量值与真值之间的偏离,包括RESE。误差是用来度量不准确度的。

这样对于检测结果只做一次时,结果的偏离

即不准确度=分析过程的不正确度+分析过程的不精密度

也即不准确度=总误差=分析过程的随机误差+分析过程的系统误差

正确度(trunees:即真实度,大量检测结果得到的均值与可接受参考值之间的一致程度,用偏倚(bias)来表示,即测试结果的期望与真值(可接受参考值)之差。

系统误差:在可重复的条件下,大量检测结果的均值与真值之差

偏倚表示的是一种系统误差。

精密度precision):在规定条件下独立测试结果之间一致程度。用标准差或变异系数来表示。分为两种,重复性(repeatability相同条件下执行连续测量结果之间的一致性程度,又称为序列内精密度和批内精密度。再现性(reproducibility在改变测量条件下执行测量结果之间的一致性程度。

随机误差random error):在可重复的条件下,对相同的被测量无数次检测结果的均值,与检测结果的差异。用标准差和变异系数度量。

总误差total error,TE:能影响分析准确度的确定误差的组合,即偏倚和不精密度的和。

基于科学原理的理论或确定值

基于一些国家或组织的实验工作的指定值或认证值

基于科学或工程组织赞助下合作实验工作中的同意值或认证值。

以上三点不能获得时,则用可获得的期望,即规定测量总体的均值。

(六)质量规范

1、质量规范简史

1963年加拿大临床化学家David Tonks建议用参考区间的宽度1/4表示允许误差。

1968年临床化学家Roy Barnett博士提出标准差表示允许误差。

1976CAP举办的分析目标讨论会议,Westgard提出了以允许总误差作为规定质量的最佳形式,一直沿用至今。

1999年斯德哥尔摩协商大会汇集了临床检验领域的许多专家协商一致的建立全球分析质量规范,其结果提出了质量规范(quality specifications的层次结构:1.评价在特定情况下分析性能对临床结果的影响、2.评价在一般情况下分析性能对临床决策的影响、3.基于生物学变异的规范 4.)基于临床医生观点的分析、5.)已发表专业推荐来自国家和国际的专家组来自地方组织或某个国家、6.)基于法规和EQA的质量规范 (法规机构 、能力验证(PT)和(或)室间质评计划(EQAS)组织者)、7.)基于当前分析技术的目标(有时间质量质量评价或能力验证计划数据证实、由当前发表方法学性能文章)。

(七)具体操作

方法确认:总是包括可报告范围、精密度、准确度和参考区间。某些研究还应包括检出限(或灵敏度)、特异度、干扰和回收以及校准品确认。CLIA规则规定对不同复杂程度分类的方法需要确认不同的特征。对不太复杂的方法,要求很少的研究。对于自建检测系统或实验室修改的方法需要更多的实验。

方法验证:除应验证仪器的安装和检验程序的操作外,对于定量方法应验证:测量精密度:包括重复性和再现性、患者结果与以前方法或参考程序之间的一致性、在整个分析测量范围内被测量的回收、高浓度的携带污染、干扰或非特异性(溶血、脂血、黄疸、容器添加剂、药物)、参考区间。对于定性方法:应验证阳性和阴性及临界值上和下标本的再现性和重复性、患者结果的一致性、携带污染、干扰或非特异性。

常用的方案

1.相关机构:NCCLA/CLSICLIA

2.具体方案

1)定量实验室方法的初步评价: CLSI EP10

2)定性测试性能评估:CLSI EP12

3)基质效应的评价:CLSI EP14

4)精密度和正确度性能的用户验证:CLSI EP15-A

5)使用ROC曲线实验室试验临床准确度评价:CLSI GP10

6)总误差估计 :CLSI EP21-A:临床实验方法总分析误差的估计

7)精密度评价: EP5-A,临床化学设备精密性能的评价

8)准确度评价:方法比较试验EP9-A,使用病人样本进行方法比较和偏倚估计

                回收实验

                干扰试验EP7-P,临床化学干扰试验

9)总误差估计 :CLSI EP21-A:临床实验方法总分析误差的估计

10)患者结果可报告范围(即线性范围)的验证:EP6-A:定量分析方法线性的评价

11)临床可报告范围的确立

12参考范围 NCCLS/CLSI C28-A :临床实验室如何定义和确定参照区间

13)交叉污染:NCCLS/CLSI EP10-A

14)分析灵敏度:CLSI EP17-A:检出限和定量下限确定方案

15)分析特异性:NCCLA/CLSI EP7-A: 临床化学干扰试验