联系我们
单位地址:湖北省武汉市武昌区丁字桥路100号
联系电话:027-87273189
传真电话:027-87273189
室间质评
您的位置:首页 > 检验质控室间质评

临床检验方法确认与性能验证相关知识(中)

发布时间:2019-11-22

评价检验结果的准确度

除按ISO/IEC l7025对实验室质量体系评价外,在实际工作中我们常用以下几种方法来核验、评价检验结果的准确度:

用标准物质评价检验结果的准确度(t检验)

用标准方法评价分析结果的准确度

回收率试验

Westgard确定不精密度的方法

考虑因素:

1.实验周期:20天以内

2.样本基质

3.检测材料数量和浓度水平:MDL

4.检测样本个数:20

5.数据计算:CV/S

6.可接受性能准则(Sw-run/Sw-day<1/4TeaSI-run<1/3TEa

7.厂家声明的验证

8.推荐的最低程度研究

9.基于未来的考虑

厂家声明的验证

CLIA并没有严格地要求实验室确定性能的可接受性。CLIA主张实验室应验证厂家精密度的声明。这可由F检验完成,如下:

1.从厂家声明材料(通常包括在仪器的文件中)中获得用于重复性实验的预期标准差和测量个数,如基于31次测量的标准差(s)为3mg/dl

2.从你的重复实验获得的标准差和测量结果个数,如基于21个测量的标准差为4mg/dl

3.计算F值,较大s平方除较小s平方,即= 16/9 =1.78

4.F值表,查分子自由度为20,分母自由度为30的临界F值,其值为1.93

5.在这一实例中,计算的F值小于临界F值,其表示实验室观测的s与厂家声明的s之间没有真正的差异。

6.结论——已验证厂家的声明。

推荐的最低程度研究

选择至少2个不同浓度控制物代表研究项目的低和高的医学决定性浓度。每一个浓度在一批内或一天内对每一控制物检测20个样本获得短期的不精密度估计值。计算每一控制物的均值、标准差和变异系数。在进行更进一步实验之前确定短期不精密度是否可接受。

20个不同天对两个控制物的每一种分析1个样本,确定长期的不精密度。计算每一材料的均值、标准差和变异系数。确定长期不精密度是否可接受。

基于未来的考虑

采用更为详细的实验设计提供关于短期和长期变异量的信息。这些设计通常使用方差分析(analysis ofvariance , ANOVA),如CLSI精密度方案所阐述EP5方案预期用于厂家的精密度评价,而EP15方案预期用于临床实验室用户进行的评价。EP15明确指出在5天的时间内每天最少是采用3个重复测量,给出总的15个测量值。为了估计总的不精密度,计算提供确定批内和批间分量的方式,然后将其结合来提供总的不精密度。在EP15附录中描述了所需要的计算,以及一组数据实例显示如何验证厂家的声明。给出的EP15允许仅只有5天的数据就可进行精密度验证,很有可能它将成为许多实验室采用的方案。

 

精密度的内容

批内精密度(重复性:repeatability

批间精密度

日内精密度

日间精密度

实验室内精密度(within-laboratory precision

实验方法

试剂和校准物:同一批号

样本:基质与临床样本相似,2个以上浓度(参考医学决定水平)。

实验天数:20天以上

实验次数:每天2批,每批2个样本,每个样本重复2

Westgard确定偏倚的方法

概述:由新方法(试验方法)和可比较方法同时分析患者样本的实验,基于两方法观测的差值估计系统误差。

考虑因素:

1.可比较方法:

可比较方法并不意味方法已证明其正确性。大多数常规实验方法归为此类。必须仔细解释试验方法和常规方法之间的任何差异。如果差别很小,则两方法具有相同的相对的准确度。如果差别很大并医学上不可接受,则需要识别哪一方法是不准确的。可采用回收和干扰实验提供这一额外的信息。

2.患者标本数量:

两个方法检测最少40份不同的患者标本。选择的这些标本覆盖整个方法的可报告范围及代表方法在常规应用预期疾病的浓度范围。检测标本的实际个数没有标本的质量重要。

3.单次或双份测量:

双份测定

不同的批、或至少不同的顺序(而不是在同一样本杯中来回重复)不同的样本(或杯)。

4.时间周期

一般建议最少5天,每天检测25个患者标本。

5.标本稳定性

一般由试验和可比较方法在两个小时内对标本进行检测,除非标本有很短的稳定性。

6.数据分析

7.图形显示数据

8.计算适当的统计量:

1.以比较方法测定值Xc为横坐标,试验方法测定值Yc为纵坐标,采用直线回归或最小二乘法拟合直线,建立回归方Yc=a+bXc,并由此计算在MDL时的SESE=Yc- Xc

2.另一常计算的指标是相关系数r,主要用于评价数据范围是否足够宽以便提供斜率和截距更好的估计。而不是判断方法的可接受性。当r0.99或更大时,简单的线性回归计算可提供斜率和截距可靠的估计。如果r小于0.99,最好是收集额外的数据扩大浓度范围。考虑到使用t-检验计算估计数据均值的系统误差,或使用更复杂的回归计算适合于数据更窄的范围。

3.对于比对结果覆盖较窄的分析范围,如:钠或钙等,计算两方法平均值之间的差,也通常称为偏倚。这种计算的偏倚从统计程序可获得提供配对t-检验计算。例如,如果钠试验方法40个分析的均值是141.0mmol/L,相同样本比较方法的均值为138.5,则平均系统误差或偏倚是2.5mmol/L141.0--138.5)。

9.可接受性能标准:

判断可接受性依赖于允许分析误差的大小,任何单个试验的总误差(TE)包括系统误差(SE)加随机误差(RE)。总误差计算公式如下:TEcalc =SE+ RE TEcalc = Biasmeas+3SmeasS meas是重复性试验估计的方法标准差,Biasmeas是从回归方程Yc=a+bXc计算的Yc-Xc或从配对t-检验计算的平均差,当TEcalc<TEa方法性能是可接受的。

10.厂家声明的验证:

CLIA并没有严格地要求实验室参照任何质量标准,甚至是其能力验证可接受性能准则判断任何观测的偏倚或系统误差的可接受性。代之,CLIA强调验证厂家的准确度(或不准确度、偏倚,系统误差)声明。如果厂家的声明没有偏倚,t-检验统计量将揭示出实验室数据证实其声明是否符合。如果从配对t检验统计计算的t值小于临界t值,则没有显著性差异,或观测到没有真实的偏倚。如果厂家声明有限的偏倚,则有用的是确定你估计偏倚的置信区间,并将其与厂家的声明的偏倚进行比较。如果厂家的声明偏倚落在观测偏倚的上下置信限之内,则证实了声明;如果不在此区间内,则没有验证声明。

11.推荐的最低程度的研究:

选择40份患者标本覆盖方法的整个可报告范围。由试验和比较方法在2小时内一天分析8份标本。很快地将结果绘制差值图并检查差异;重新分析给出差异结果的标本消除离群值,识别潜在的干扰。如果没有观测到差异的结果,继续实验5天。如果在头5天观测到差异,继续另外的5天。绘制所有数据的比对图评价范围,离群值和线性。计算相关系数,如果r0.99或更大,计算简单直线回归统计量及在医学决定浓度水平上估计系统误差。如果r<0.975,从t-检验统计量估计数据均值的偏倚或另外从更为复杂的回归技术进行估计。使用方法决定图结合估计的系统误差和随机误差,并对方法观测的总误差作出判断。

12.未来的发展方向

 

CLSI EP15-A,精密度和正确度性能的用户验证:User Verification of Performance for

Precision and Trueness

主要的3种方案:

1.精密度基于5天,每天分析3份重复控制样本;

2.真实度基于分析20份患者标本;

3.真实度基于分析至少2份具有指定值的参考物质。

EP15 精密度方案:

规定熟悉时期学习分析系统的适当操作,包括校准、维护程序和监测程序(质量控制)。使用厂家推荐的质量控制程序监测在EP15检测方案期的性能。选择的控制物应具有的浓度水平接近医学决定性点。用于声明验证的控制物应选择接近于医学决定点的浓度及接近于厂家进行其精密度声明试验所具有的浓度。如果可能,它们应该与建立厂家声明使用相同的材料,或非常类似的材料(类似的基质)。

1.五天,每日一分析批,每日两个浓度水平,每一水平上同一样本三次重复测定。

2.如果因为质量控制程序或操作困难判断一批为失控,剔除数据,并执行额外的批。

3.包括正常地使用每日质量控制样本。

4.真实度试验样本可在同一批内进行检测。

5.操作者按照厂家说明书规定进行校准。如果厂家指出在其声明它的精密度数据是在多个校准周期下产生的,则操作者在实验期间选择重新校准。