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高中风险地区大规模筛查新冠核酸检测经验分享

发布时间:2022-05-16



高中风险地区大规模筛查新冠核酸检测经验分享



一区试剂配制



试剂配制是核酸检测的第一步,也是全流程完善完备的起跑线,决定了后续工作的有效性。



(一)时间及流程优化建议



气模实验室每天的检测任务一般是4-8万管,因此,试剂配制工作量非常大,节约时间、提高效率是很重要。可以从以下几方面节约时间:



1.扩增试剂的提前解冻。现场后勤工作人员可以根据标本量,在核酸检测人员到达场地的1-2小时前将一定比例的扩增试剂放置室温,提前解冻。



2.扩增试剂的反应液与酶可以数支按照正确比例同时倒入50ml离心管中进行混匀,而不是分别混合混匀。这样可以节约开盖拧盖的次数,减少污染,省时省力。



3.使用全自动液体工作站进行自动分液,而不是使用排枪分液。排枪分液操作要求高,连续使用移液器枪头会松动,易导致分液体积不准。使用全自动液体工作站省时、省力、精准度高。



(二)注意事项



1.试剂配制的量尽可能与检测量齐平。试剂配制后,放置时间过久,将导致酶失活,出现假阴性;以及探针断裂致使荧光基团和淬灭基团游离,扩增出现假的单基因起跳情况。在人员充足的情况下,可以安排专人在一区根据实际检测量进行动态的试剂配制。



2.动作轻柔,严防人源性污染。物品进入一区前,应该消毒。尽量减少未被防护装备遮盖的身体部位直接与一区内物品接触。试剂混合、分液、分装动作都应轻柔,手套避免接触管口、管盖等部位。



二区样本制备



  样本制备是核酸检测中工作量最重、最繁琐的一个区域,人员多、岗位多、设备杂、空间拥挤。样本制备的每一个步骤都至关重要。



(一)时间及流程优化建议



1.由于岗位复杂,建议各个岗位的人员相对固定,可以降低失误率。



2.标本接收后,需震荡混匀,101管和201管需适当延长震荡时间。震荡完成,静置5分钟后,再进行加样,减少开盖时的液体飞溅和气溶胶污染。



3.每行标本的首尾应使用标记笔进行标记和编号。



4.如果加样错误,如果能明确知道加样错误位置,在布板单上标注清楚;如不明确,需整板重做。



5.加样完成后,标本的摆放:可按照加样人的不同分开摆放。在标本架上用便签纸粘贴板号以及加样人-加样板信息,如某某-1”,以方便查找。同时,流转单上也需标注。



6.标本的丢弃:整板标本结果上传完毕,由三区核对后发出指令,二区人员方可丢弃标本(每板标本分别打包丢弃,黄色小垃圾袋外标注板号)。如遇某板标本中有复查标本,此板标本需暂存,直至复查完毕。



7.复查需单独布板,且相邻位置尽量不同时加阳性复查标本。



(二)注意事项



1.核酸提取过程所有的试剂(裂解液、洗涤液、磁珠、洗脱液等)都应属于同一批号,写上板号和顺序号,且标记的位置朝向一致。



2.如因试剂顺序摆放错误导致无扩增结果,需整板重做。



3.提取试剂使用前需抽样检查底部是否有结晶形成,胍盐结晶可导致磁珠吸附和释放效能降低,造成核酸提取失败。如因为气温太低导致的结晶,需37摄氏度复温,其他原因导致的结晶,需更换试剂。



4.提取完成后,若发现磁棒套残留磁珠过多,以及洗脱液内残留磁珠,此台提取仪应停用,联系仪器工程师。



5.点样和贴膜/加盖岗位,尤其需注意手套导致的携带污染,需常更换或消毒。



6.若加样人员发现采样管内无拭子,一律按退单处理(环境采样除外)。



7.上机前需将96孔板瞬时离心后方可上机扩增,如叠放,需考虑离心力是否会将远端板的贴膜挤压,导致密封性降低。



三区扩增及分析



  由于气膜实验室内的PCR扩增仪可能品牌和型号众多,扩增区工作人员应对不同PCR扩增仪都有一定的了解,进舱前熟悉操作。扩增区的操作人员,应当熟练掌握荧光PCR的原理、CT值的意义、基线的调整、阴阳性质控的意义、结果的判读等,且细心、谨慎。



(一)时间及流程优化建议



1.阳性或弱阳性结果,需双人确认,双签字。



2.每批复查的布板单和原始单都应汇总在一起,简单装订,方便核实。



3.原始单最下面结果分析部分,应该对该板结果进行总结,如全阴“1个内标未起复查“1个双阳复查“1个单阳复查等,并签名,以便结果录入。



(二)注意事项



1.注意扩增仪的荧光信号收集方式,是侧面扫描或顶部扫描。如侧面扫描,则不能使用不透明的扩增管。如果顶部扫描,则不能使用硅胶盖板或不透明/磨砂的八连管盖。



2.所有的扩增管上机前,需再次确认每个管管盖严密性。



3.扩增仪上机后,需标注阴性和阳性质控位置,其余的样本孔需编号,与布板单一致。



4.尽量在程序结束、冷却后再打开扩增仪热盖,防止爆盖。



5.结果分析时,不同的试剂尤其需要注意各个通道代表的是哪种靶基因,不能混淆。



6.结果分析时,如扩增曲线出现斜线、非正立的S型曲线等情况,需注意查看原始曲线,并调整基线,重新分析。



7.不同的试剂进行同一管阳性标本复查时,两者CT值的差距需要在合理范围内(根据程序设置方式、点样量、总体积等提前计算)。



8.出现非常靠后的单基因起跳,无论说明书是否已经判断为阴性,都应该进行双试剂复查。在病例较多的地区,患者呼吸道排毒量个体差异较大,非常靠后的单基因起跳,可能是少量排毒期,排除污染后,可上报可疑。



9.有效控制舱内温度,多台扩增仪散热量巨大,应减少由于环境温度过高导致扩增仪损坏。



各区域交流环节



各区之间的交流是很重要的,下面对各区都需注意或涉及到的注意事项进行总结。



1.扩增试剂在点样前和点样后,都应该避免紫外线的照射,尽量避光。



2.每一板标本的流转都应该随时携带流转单,流转单上应标注板号、加样人-加样板如某某-1”、提取人、提取仪编号、扩增上机人、扩增仪编号、结果分析人员等信息。



3.各区域之间尽量减少不必要的人员、物品流动。尤其避免人员和物品的逆向流动。如需流动,需做好消杀、严防产物污染。



4.如出现某一板有多个内标不出的情况,先确定是否为环境样本,检查采样管的基本情况。再通知二区将标本再次震荡后,更换加样人整板重新加样、更换提取仪提取、更换扩增仪进行扩增。如情况仍然未得到改善,可通知重新采样。



5.若初筛出现双阳标本,原管复查后变成阴性,应找出原始板,整板进行复查。



6.75%酒精能杀灭新冠病毒,防止生物危害,但是并不能有效防止产物污染,且易燃易爆。因此,杜绝核酸产物污染,尽可能使用含氯消毒液或核酸清除剂。



7.如大量标本出现ORF1abN基因翘尾,应先考虑核酸产物污染,实验室暂停使用。使用含氯消毒液或核酸清除剂进行全面消杀,尤其是一些隐秘位置,如试剂储存箱、冰箱门把手、提取仪及全自动分液工作站屏幕、排枪等。进行实验室内环境样本检测、无标本空白对照等多次试验,无污染后方可重新投入使用。